免疫細(xì)胞存儲是將免疫細(xì)胞置于液氮低溫條件（-196℃）下存儲,，使細(xì)胞暫時脫離生長狀態(tài),，在需要的時候復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行應(yīng)用,。其原理是：在低溫條件下,，降低細(xì)胞的酶活性，即細(xì)胞代謝處于“暫停狀態(tài)”,，從而使細(xì)胞活性保存下來,。
什么是免疫細(xì)胞？
免疫細(xì)胞是指參與免疫反應(yīng)的白細(xì)胞群體,，涵蓋先天性淋巴細(xì)胞,、吞噬細(xì)胞及能識別抗原、產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)的淋巴細(xì)胞等,。
它們時刻與數(shù)以億計的微生物,、變異細(xì)胞、癌細(xì)胞等對抗,，顯著降低各類疾病的發(fā)生風(fēng)險,。
作為人體內(nèi)部的天然衛(wèi)士，扮演著修復(fù)細(xì)胞故障,、維護(hù)整體健康的至關(guān)重要的角色,。
免疫細(xì)胞如何凍存？
免疫細(xì)胞儲存,，是通過采集自體外周血,，于符合GMP標(biāo)準(zhǔn)的實驗室中分離、提取免疫細(xì)胞,，經(jīng)過體外增殖,，形成數(shù)億級別的高活性細(xì)胞群。
▲ 細(xì)胞凍存流程
隨后,，采用全自動冷凍技術(shù),，將這些細(xì)胞置于-196℃液氮環(huán)境中長期保存，確保即使時隔20年,，細(xì)胞仍保有青春時期的活力,，當(dāng)需要時,，可隨時提取使用。
▲ -196℃數(shù)字化生物樣本管理存儲系統(tǒng)
免疫細(xì)胞可以凍存多久,？
科學(xué)研究表明,，在極低溫度的冷凍環(huán)境中，細(xì)胞能夠進(jìn)入一種類似休眠的狀態(tài),。在這種狀態(tài)下,，細(xì)胞內(nèi)的酶活性被顯著降低，從而避免了電離損傷的發(fā)生,，使得細(xì)胞能夠?qū)崿F(xiàn)長期保存,。例如，在-70℃的冰箱中,，細(xì)胞可以安全地存放長達(dá)一年之久。而當(dāng)細(xì)胞被保存在-196℃的液氮中時,，它們的保存期限幾乎是無限的,。這種技術(shù)為細(xì)胞的長期保存提供了一種有效的解決方案。
▲ 將免疫細(xì)胞移入液氮罐
為什么要凍存健康的免疫細(xì)胞
2021年《中國免疫學(xué)雜志》發(fā)表了一篇關(guān)于《冷凍保存對NK細(xì)胞活率及其腫瘤殺傷效果的影響》[1]的研究文章,。
▲ 參考文獻(xiàn)1
該研究經(jīng)過對比研究表明,，冷凍保存的NK細(xì)胞滿足臨床應(yīng)用所要求的活率和高效殺傷腫瘤細(xì)胞能力，可以發(fā)展成為即用型細(xì)胞藥物,，具有廣泛的臨床應(yīng)用前景,。
活力：復(fù)蘇后活力不減
研究發(fā)現(xiàn)，即使冷凍三個月,，NK細(xì)胞復(fù)蘇后的活力仍可達(dá)到92%左右,，即使復(fù)蘇24小時后，活力仍可達(dá)到80%,。這意味著,，它們?nèi)跃邆淞己玫膽?zhàn)斗能力。
▲ 參考文獻(xiàn)1：凍存前后NK細(xì)胞活力對比
能力：關(guān)鍵能力仍保留
對于新鮮和冷凍的NK細(xì)胞的腫瘤殺傷效果,，實驗結(jié)果同樣讓人欣喜,。
NK細(xì)胞能夠分泌一種叫做IFN-γ的物質(zhì)，有助于擊敗腫瘤,。冷凍后,，這一能力雖然有所下降，但差異并不顯著,。無論是在不同的靶點對比下,，還是在不同的冷凍時間內(nèi)，它們對癌細(xì)胞的殺傷效果幾乎沒有差異,。
▲ 參考文獻(xiàn)1：新鮮及凍存NK細(xì)胞IFN-γ的分泌量
▲ 參考文獻(xiàn)1：新鮮NK細(xì)胞與凍存NK細(xì)胞表面活化性受體表達(dá)情況
▲ 參考文獻(xiàn)1：新鮮NK細(xì)胞與凍存NK細(xì)胞表面活化性受體表達(dá)情況
▲ 參考文獻(xiàn)1：96小時NK細(xì)胞對人肺癌細(xì)胞A549的殺腫瘤效果
不論是新鮮的還是“冷藏”后的,，NK細(xì)胞都是我們身體的勇敢戰(zhàn)士。以上研究證明，即使經(jīng)過冷凍保存,，它們的戰(zhàn)斗力也幾乎沒有減弱,。
凍存的免疫細(xì)胞與新鮮免疫細(xì)胞效果相同
2022年，一篇發(fā)表《Front Oncol》雜志上的文獻(xiàn)[2]通過對比了從成人外周血分離的新鮮免疫細(xì)胞和分離后凍存過的免疫細(xì)胞在制備CAR-T后細(xì)胞的活性及臨床應(yīng)用后患者的臨床治療情況,。
▲ 參考文獻(xiàn)2
研究數(shù)據(jù)證明,，冷凍保存的免疫細(xì)胞仍顯示出很高的抗腫瘤效力和特異性，且能擴(kuò)增足夠的細(xì)胞數(shù)量用于臨床治療腫瘤并使患者完全緩解,，并且對比新鮮免疫細(xì)胞,，效果沒有統(tǒng)計學(xué)差異。這再次印證了凍存后的免疫細(xì)胞可用于今后細(xì)胞臨床治療的可行性,。
免疫細(xì)胞治療技術(shù)
最常見的免疫細(xì)胞治療有：腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞（TIL）療法,、因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（CIK）療法、自然殺傷細(xì)胞（NK）療法,、嵌合抗原受體T細(xì)胞免疫（CAR-T）療法等,。
01
TIL療法
是從患者腫瘤組織中分離出淋巴細(xì)胞，在體外進(jìn)行大規(guī)模擴(kuò)增與培養(yǎng)后,，回輸至患者體內(nèi),，進(jìn)而特異性地殺傷腫瘤細(xì)胞，為免疫檢查點抑制劑失敗的實體瘤患者帶來了新的希望,。作為一種新型的抗腫瘤效應(yīng)細(xì)胞,，主要作用于干預(yù)皮膚、腎,、肺,、頭頸部、肝,、卵巢部位的原發(fā)或繼發(fā)腫瘤,。
02
CIK療法
CIK細(xì)胞是人體免疫突擊兵，全名cytokine-induced killer,。是人體外周靜脈血單個核細(xì)胞在體外培養(yǎng)獲得的一群異質(zhì)性細(xì)胞,，主要用于手術(shù)和放化療后微小殘留病灶的清除。
03
NK療法
自然殺傷細(xì)胞（NK）是人體內(nèi)重要的先天免疫細(xì)胞,，具有免疫清除和免疫監(jiān)視等功能,，通常被認(rèn)為是抵抗病毒/細(xì)菌感染的第一道防線，無需特異性抗原刺激,，即可殺傷靶細(xì)胞,。
04
CAR-T療法
主要是將嵌合抗原受體的特異性與T細(xì)胞的免疫作用相結(jié)合，再通過特異性識別,，殺傷腫瘤細(xì)胞,，近幾年通過優(yōu)化改良在臨床腫瘤治療上取得很好的效果,，是一種非常有前景的，能夠精準(zhǔn),、快速,、高效，且有可能治愈癌癥的新型腫瘤免疫治療方法,，在治療惡性血液腫瘤方面展現(xiàn)出了巨大潛力和應(yīng)用價值,。
免疫細(xì)胞儲存技術(shù)
1.接收與預(yù)處理：觀察與檢測各項指標(biāo)都符合后，進(jìn)行一系列的預(yù)處理,，如：分離,、提取等。
2.低溫冷凍：免疫細(xì)胞一般在液氮中保存,，其溫度為-196°C,。這樣的低溫可以確保細(xì)胞的生理和生化活性在長時間內(nèi)得到保持。
3.冷凍介質(zhì)：為保護(hù)細(xì)胞不受冰晶傷害,，通常使用含有防凍劑的特殊冷凍介質(zhì),，例如 DMSO (Dimethyl sulfoxide)。
4.緩慢冷凍：為避免細(xì)胞受到快速冷凍的傷害,，應(yīng)使用專門的冷凍設(shè)備進(jìn)行控制速率的冷凍。
5.無菌條件：免疫細(xì)胞的采集,、處理和存儲都應(yīng)在無菌條件下進(jìn)行,，以避免微生物污染。
6.樣本標(biāo)識：每個樣本都應(yīng)清晰地標(biāo)識,，包括捐獻(xiàn)者信息,、采集日期、細(xì)胞類型和數(shù)量等,。
7.質(zhì)量控制：定期對存儲的細(xì)胞進(jìn)行質(zhì)量檢查,，包括細(xì)胞活性、純度和無菌性檢測,。
8.安全存儲：確保液氮罐或冷凍存儲器具有穩(wěn)定的電源和溫度監(jiān)控系統(tǒng),，并定期進(jìn)行維護(hù)和檢查。應(yīng)有備用的電源和液氮供應(yīng),。
9.數(shù)據(jù)庫管理：建立和維護(hù)一個細(xì)胞樣本數(shù)據(jù)庫,，記錄每個樣本的所有相關(guān)信息。
10. 運(yùn)輸和轉(zhuǎn)移：如果需要將細(xì)胞樣本運(yùn)輸?shù)狡渌胤?，?yīng)使用專門的運(yùn)輸容器,，并確保在整個運(yùn)輸過程中維持適當(dāng)?shù)臏囟取?/span>
11. 復(fù)蘇：在使用前，免疫細(xì)胞需要經(jīng)過特定的復(fù)蘇程序,，以確保細(xì)胞的活性和功能,。
